Нейроэндокринные и нейральные маркеры

В составе микротрубочек выделяют два структурных тубулина, α- и β-тубулины. Для человека характерны 7 изоформ β-тубулина, которые имеют тканеспецифичное распределение в организме (Luduena R., 1998). Долгое время β-тубулин класса III считался нейрон-специфическим маркером (Katsetos C., Herman M., Mork S., 2003). Кроме того, экспрессия нейрон-специфического β-III тубулина была обнаружена в некоторых опухолях, таких как рак груди и эпителиальных опухолях (Jirasek T. et al., 2007).

Для проведения иммуногистохимических реакций использовали кроличьи поликлональные антитела к к нейрон-специфическому β-III тубулину («Abcam», 1:8 000, 1:16 000). Проводилось термическое демаскирование антигена  (Кипячение срезов в 0,01М цитратном буфере, рН 6,0, в микроволновой печи в течение 5 мин + остывание срезов в буфере в течение 20 мин.) Время инкубации первичных антител - 20 минут. В качестве визуализирующей системы применяли Ultra Vision ONE detection system («Thermo Scientific»). Хромогеном во всех реакциях служил раствор DAB.

     
При маркировании антителами к  нейрон-специфическому β-III тубулину в поджелудочной железе взрослого человека выявляются крупные пучки нервных волокон в соединительнотканной капсуле железы, более тонкие нервы в междольковой соединительной ткани, внутри долек, вблизи сосудов и протоков. Кроме того, в ацинарной части обнаружена сеть тонких нервных волокон, проходящих самостоятельно или вдоль мелких сосудов и протоков , которая не выявляется на гистологических препаратах. Нервные ганглии локализованы преимущественно в междольковой соединительной ткани, реже нервные ганглии встречаются внутри долек. Позитивная реакция на  нейрон-специфический β-III тубулин наблюдается, помимо структур нервной системы, в эндокринных клетках поджелудочной железы человека. Реакция на нейрон-специфический β-III тубулин в структурах нервной системы заметно интенсивнее, чем в эндокринных клетках поджелудочной железы

Молекулы клеточной адгезии (CAM, cell adhesion molecules) участвуют в регуляции пространственной и временной агрегации, диссоциации, миграции и сортировке клеток при развитии тканей и органогенезе. NCAM (neural cell adhesion molecule – молекула адгезии нервных клеток) является одним из представителей молекул клеточной адгезии, которая участвует в образовании гомофильных и гетерофильных связей между клетками или между клетками и внеклеточным матриксом преимущественно в нервной системе (Rutishauser U., 1993; Walsh F.S. and Doherty P., 1997). Помимо нервной системы NCAM выявляется в некоторых других тканях. В частности, экспрессия NCAM обнаружена в эндокринных клетках поджелудочной железы у некоторых животных (Rouiller D.G., Cirulli V. and Halban P.A., 1990; Moller C.J. et al.,1992).
Для проведения иммуногистохимических реакций использовали мышиные моноклональные антитела к NCAM («LabVision», 1:100, 1:200). Проводилось термическое демаскирование антигена  (Кипячение срезов в 0,01М цитратном буфере, рН 6,0, в микроволновой печи в течение 5 мин + остывание срезов в буфере в течение 20 мин.). Время инкубации первичных антител - 20 минут. В качестве визуализирующей системы применяли Ultra Vision ONE detection system («Thermo Scientific»). Хромогеном во всех реакциях служил раствор DAB.
По данным литературы и нашим результатам в эндокринных клетках поджелудочной железы взрослого человека иммунореактивность к NCAM выявляется в большинстве эндокринных клеток, как одиночных, так и входящих в состав панкреатических островков, и ассоциирована с плазматической мембраной клеток (Eidelman S. et al., 1989). На всех сроках развития  реакция на NCAM в эндокринных клетках поджелудчной железы менее интенсивная, чем в структурах нервной системы.